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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:

32卷

期数:

2026年04期

页码:

325-331,385

栏目:

论著

出版日期:

2026-07-10

文章信息/Info

Title:

Study on chemoresistance of breast cancer organoids in MMTV-PyMT mouse

文章编号:

1006-8147（2026）04-0325-08

作者:

顾问; 张锐

（天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所生物化学与分子生物学研究室，恶性肿瘤国家临床医学研究中心，天津市恶性肿瘤临床研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，乳腺癌防治教育部重点实验室，天津 300060）

Author(s):

GU Wen; ZHANG Rui

（Department of Biochemistry and Molecular Biology， Tianjin Medical University Cancer Institute & Hospital； National Clinical Research Center for Cancer； Tianjin′s Clinical Research Center for Cancer； Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy， Tianjin； Key Laboratory of Breast Cancer Prevention and Therapy， Tianjin Medical University， Ministry of Education， Tianjin 300060， China）

关键词:

乳腺癌; 类器官; 药物耐受

Keywords:

breast cancer;  organoids;  chemoresistance

分类号:

R737.9

DOI:

10.20135/j.issn.1006-8147.2026.04.0325

文献标志码:

A

摘要:

目的：构建不同肿瘤进展阶段的小鼠乳腺病毒介导多瘤病毒中间T抗原（MMTV-PyMT）乳腺癌类器官模型，评估其化疗耐受表型及相关分子特征。方法：取16、20、24周龄雌性MMTV-PyMT小鼠乳腺肿瘤组织（按周龄分16、20、24周组，每组3例）建立原代类器官。采用HE染色观察组织形态，免疫组织化学检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER2）和波形蛋白（Vimentin）表达。实验组分为多柔比星组和多西他赛组，分别以多柔比星和多西他赛处理类器官，通过CCK-8实验、剂量-反应曲线和显微镜观察评价药物敏感性并计算半数抑制浓度（IC50）。采用Western印迹检测上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达，采用反转录-定量PCR（RT-qPCR）检测外排泵相关基因mRNA水平。结果：成功建立并稳定传代各周龄MMTV-PyMT小鼠乳腺癌类器官。各组类器官均具备腔样结构且呈管腔样分子特征，与16周龄组相比，20周龄组类器官中ER阳性率降低（t=2.334，P＜0.05）；与20周龄组相比，24周龄组类器官中ER阳性率降低（t=3.198，P＜0.05），Vimentin阳性率升高（t=9.038，P＜0.000 1）。与16、20周龄多柔比星和多西他赛组相比，24周龄对应的实验组细胞活力较高（F=53.57、57.7，均P＜0.05）。与16周龄组相比，20、24周龄组多柔比星（F=3.253，P＜0.05）和多西他赛（F=10.90，P＜0.000 1）的72 h IC50升高，对应耐药指数分别为1.34和1.35，1.99和2.23。与16、20周龄组相比，24周龄组类器官数量较多（F=14.08、6.776，均P＜0.05）、直径较大（F=26.06、26.33，均P＜0.05）。随周龄增加，类器官中E-Cadherin蛋白水平逐渐降低，N-Cadherin、Vimentin和Slug蛋白水平逐渐升高（E-Cadherin：F=48.19，P<0.05；N-Cadherin：F=290，P<0.05；Vimentin：F=301.2，P<0.05；Slug：F=266.6，P<0.05），Abcb1a和Abcg2 mRNA水平也呈升高趋势（F=74.16、4 853，均P<0.05）。结论：建立的MMTV-PyMT小鼠乳腺癌类器官可反映肿瘤进展过程中化疗耐受性增强及EMT相关分子改变，可为乳腺癌耐药机制研究和药物评价提供体外模型。

Abstract:

Objective： To establish mouse mammary tumor virus-polyoma middle T antigen （MMTV-PyMT） breast cancer organoid models derived from different stages of tumor progression， and evaluate their chemoresistance phenotypes and associated molecular features. Methods： Primary organoids were established from mammary tumor tissues of female MMTV-PyMT mice aged 16， 20， and 24 weeks， divided into 16， 20， and 24 week groups， with three cases in each group. Hematoxylin and eosin （HE） staining was performed to observe tissue morphology， and immunohistochemistry was used to detect the expression of estrogen receptor （ER）， progesterone receptor （PR）， human epidermal growth factor receptor 2 （HER2）， and Vimentin. The experimental group was divided into a doxorubicin group and a docetaxel group， and the organoids were treated with doxorubicin and docetaxel， respectively. Drug sensitivity was evaluated by CCK-8 assay， dose-response curves， and microscopic observation， followed by calculation of the half-maximal inhibitory concentration （IC50）. Western blotting was used to detect the expression of epithelial-mesenchymal transition （EMT）-related proteins， and reverse transcription-quantitative PCR （RT-qPCR） was used to determine the mRNA levels of efflux pump-related genes. Results： MMTV-PyMT mouse breast cancer organoids derived from mice of different ages were successfully established and stably passaged. All groups of organoids exhibited lumen-like structures and luminal-like molecular features. Compared with the 16 week group， the 20 week group showed a decreased ER-positive rate in organoids （t=2.334， P<0.05）. Compared with the 20 week group， the 24 week group showed a further decrease in the ER-positive rate （t=3.198， P<0.05） and an increased Vimentin-positive rate （t=9.038， P<0.000 1）. Compared with the corresponding doxorubicin- and docetaxel-treated groups at 16 and 20 weeks， the 24 week treatment groups exhibited higher cell viability （F=53.57， 57.70， both P<0.05）. Compared with the 16 week group， the 20 and 24 week groups showed increased 72 h IC50 values for doxorubicin （F=3.253， P<0.05） and docetaxel （F=10.90， P<0.000 1）， with corresponding RI of 1.34 and 1.35， 1.99 and 2.23， respectively. Compared with the 16 and 20 week groups， the 24 week group had a greater organoid number （F=14.08， 6.776， both P<0.05） and larger organoid diameter （F=26.06， 26.33， both P<0.05）. With increasing age， E-Cadherin protein levels gradually decreased， whereas N-Cadherin， Vimentin， and Slug protein levels gradually increased in the organoids （E-Cadherin： F=48.19， P<0.05； N-Cadherin： F=290， P<0.05； Vimentin： F=301.2， P<0.05； Slug： F=266.6， P<0.05）. The mRNA levels of Abcb1a and Abcg2 also showed an upward trend （F=74.16， 4 853， both P<0.05）. Conclusion： The established MMTV-PyMT mouse breast cancer organoids can reflect the enhanced chemoresistance and EMT-related molecular alterations during tumor progression， providing an in vitro model for investigating mechanisms of breast cancer drug resistance and evaluating therapeutic agents.

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备注/Memo

备注/Memo:

（2026-01-27收稿）
基金项目 天津市教委科研计划项目（2023KJ082）
作者简介 顾问（2002-），男，硕士在读，研究方向：肿瘤分子生物学；通信作者：张锐，E-mail：ruizhang_tjmu@tmu.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2026-07-15