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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:

31卷

期数:

2025年05期

页码:

430-434,452

栏目:

基础医学

出版日期:

2025-09-20

文章信息/Info

Title:

The construction and validation of a neuroblastoma cDNA expression library

文章编号:

1006-8147(2025)05-0430-06

作者:

陈俞伶¹; 刘喆²

1.天津医科大学基础医学院免疫学系，天津300070；2.杭州师范大学基础医学院生物化学与分子生物学系，杭州 311121

Author(s):

CHEN Yuling¹;  LIU Zhe²

1.Department of Immunology， School of Basic Medical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China； 2.Department of Biochemistry and Molecular Biology， School of Basic Medical Sciences，Hangzhou Normal University， Hangzhou 311121， China

关键词:

神经母细胞瘤; cDNA文库; NGS测序

Keywords:

neuroblastoma;  cDNA library;  NGS sequencing

分类号:

R34

DOI:

10.20135/j.issn.1006-8147.2025.05.0430

文献标志码:

A

摘要:

目的：构建分化潜能更高的神经母细胞瘤肾上腺素能（ADRN）型细胞cDNA表达文库。方法：提取人神经母细胞瘤细胞N型细胞株SK-N-BE（2）、SK-N-SH、SH-sy5y和IMR-32在对数生长期阶段的mRNA，随后应用SMART（Switching Mechanism At 5′ end of the RNA Transcript）技术制备双链cDNA，同时在其两端连接5′Adapter。进一步采用同源重组方法构建cDNA文库，并对电转化后的文库进行扩增，测定文库的滴度和库容量，同时利用PCR方法鉴定插入片段大小，最后再对cDNA文库进行NGS测序（Next Generation Sequencing），检测文库中基因含量。结果：建立的pcDNA3.1（+） cDNA表达文库总库容量为1×109 CFU，文库滴度为2.52×108 CFU/mL，平均插入片段为1.2 kb，阳性率为100%，NGS测序分析结果显示文库包含9 247个基因。结论：本研究成功构建pcDNA3.1（+）表达文库，具有较好的质量和良好的多态性，为后续特异性基因的筛选研究提供了有力工具。

Abstract:

Objective： To construct a cDNA expression library of neuroblastoma adrenergic （ADRN） type cells with higher differentiation potential. Methods： mRNA was extracted from human neuroblastoma N-type cell lines SK-N-BE（2）， SK-N-SH， SH-SY5Y， and IMR-32 at the logarithmic growth phase. Double-stranded cDNA was prepared using Switching Mechanism At 5′end of the RNA Transcript （SMART） technique， with 5′adapters were ligated to both ends. The cDNA library was constructed via homologous recombination. The library was amplified after electroporation. Library titer and total capacity were assessed， and the sizes of inserted fragments were identified by PCR. Finally， next-generation sequencing（NGS） was performed on cDNA library to detect the gene content in the library. Results： A pcDNA3.1（+） cDNA expression library was successfully constructed with a total capacity of 1×109 CFU， a titer of 2.52×108 CFU/mL， and an average insert size of approximately 1.2 kb， achieving a 100% positive cloning rate. NGS analysis revealed that the library encompassed 9 247 genes. Conclusion： In this study， pcDNA3.1（+） expression library is successfully constructed with good quality and polymorphism.

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备注/Memo

备注/Memo:

基金项目:国家自然科学基金面上项目（81773034）
作者简介:陈俞伶（1999-），女，硕士在读，研究方向：免疫学；通信作者：刘喆，E-mail：zheliu@tmu.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2025-10-01