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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:

31卷

期数:

2025年05期

页码:

421-429

栏目:

基础医学

出版日期:

2025-09-20

文章信息/Info

Title:

Screening and functional characterization of single-domain antibodies targeting MN1

文章编号:

1006-8147(2025)05-0421-09

作者:

刘旭婧¹; 韩雪¹; 李铭宸¹; 马振毅²; 刘喆²

1.天津医科大学基础医学院免疫学系，天津300070；2.杭州师范大学基础医学院生物化学与分子生物学系，杭州311121

Author(s):

LIU Xujing¹;  HAN Xue¹;  LI Mingchen¹;  MA Zhenyi²;  LIU Zhe²

1.Department of Immunology， School of Basic Medical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China； 2.Department of Biochemistry and Molecular Biology， School of Basic Medical Sciences， Hangzhou Normal University， Hangzhou 311121， China

关键词:

isPLA-seq; 单域抗体; MN1; 转录组测序; 转录调控

Keywords:

isPLA-seq;  sdAbs;  MN1;  RNA-seq;  transcriptional regulation

分类号:

R361+.3

DOI:

10.20135/j.issn.1006-8147.2025.05.0421

文献标志码:

A

摘要:

目的：筛选并验证内在无序蛋白Meningioma-1（MN1）单域抗体（sdAbs）及其生物学功能。方法：利用原位邻近连接分析联合二代测序技术（isPLA-seq）筛选合成sdAb库，并借助截短突变体结合实验和免疫共沉淀（Co-IP）验证抗体特异性；通过假单胞菌外毒素A（ETA）跨膜肽递送系统导入重组sdAb；采用转录组测序（RNA-seq）、基因集富集分析（GSE）及双荧光素酶报告实验解析其分子机制。结果：成功筛选出靶向MN1的sdAbs，其中特异性结合MN1的N端polyQ无序区域的sdAb #11，通过ETA递送入胞内可显著抑制MN1功能。与正常细胞相比，sdAb #11诱导U2OS细胞周期停滞，G0/G1期比例升高（F=565.30， P<0.001， sdAb #11/NC： t=13.25， P<0.001），细胞的集落形成能力降低；RNA-seq显示该sdAb通过干扰BAF（mSWI/SNF）复合物的染色质重塑活性，进而下调致癌基因表达，同时降低MN1 mRNA水平。结论：MN1 sdAb具有抑制MN1功能，阻滞细胞周期，下调致癌基因的潜能。

Abstract:

Objective： To screen and functionally characterize single-domain antibodies（sdAbs） targeting the intrinsically disordered protein Meningioma-1（MN1） and their biological functions. Methods： A synthetic sdAb library was screened using in situ proximity ligation assay sequencing（isPLA-seq）. Antibody specificity was validated through truncated mutant binding assays and co-immu-noprecipitation（Co-IP）. Recombinant sdAbs were delivered into cells via a Pseudomonas exotoxin A （ETA） transmembrane peptide system. Molecular mechanisms were investigated using transcriptome sequencing （RNA-seq）， gene set enrichment analysis （GSE）， and dual-luciferase reporter assays. Results： The sdAbs targeting MN1 were successfully screened. Among them， the sdAb#11， which specifically bound to the N-terminal polyQ disordered region of MN1， could significantly inhibit the function of MN1 when delivered into the cells by ETA. Compared with normal cells， sdAb#11 induced U2OS cell cycle arrest， increased the ratio of G0/G1 phase（F=565.30， P<0.001， sdAb #11/NC： t=13.25， P<0.001）， and reduced colony forming ability of cells. RNA-seq analysis revealed that sdAb downregulated oncogene expression and concomitantly reduced MN1 mRNA levels by interfering chromatin remodeling activity of the BAF（mSWI/SNF） complex. Conclusion： MN1 sdAb has the potential to inhibit the function of MN1， block the cell cycle and down-regulate oncogenes.

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　GAO Qiu-yun,SUN Ya-nan,MA Zhen-yi.Screening and functional investigation of anti-GSDMD single-domain antibodies[J].Journal of Tianjin Medical University,2023,29(05):622.

备注/Memo

备注/Memo:

基金项目:国家自然科学基金（82173320）
作者简介:刘旭婧（1999-），女，硕士在读，研究方向：免疫学；通信作者：刘喆，E-mail：zheliu@tmu.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2025-10-01