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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:

31卷

期数:

2025年05期

页码:

412-420

栏目:

基础医学

出版日期:

2025-09-20

文章信息/Info

Title:

Study on the inhibitory effect of raloxifene on glioma cells and combination therapy with temozolomide

文章编号:

1006-8147(2025)05-0412-09

作者:

邱天¹; 刘恺宁²; 王广秀¹; 张安玲¹; 王虎²; 贾志凡¹

1.天津医科大学总医院神经病学研究所神经肿瘤实验室，天津 300052；2.天津市环湖医院神经外科，天津 300350

Author(s):

QIU Tian¹;  LIU Kaining²;  WANG Guangxiu¹;  ZHANG Anling¹;  WANG Hu²;  JIA Zhifan¹

1. Department of Neuro-oncology， Institute of Neurology， General Hospital of Tianjin Medical University， Tianjin 300052， China；2. Department of Neurosurgery， Tianjin Huanhu Hospital， Tianjin 300350， China

关键词:

胶质瘤;  雷洛昔芬 ; 替莫唑胺

Keywords:

glioma;  raloxifene;  temozolomide

分类号:

R651.1

DOI:

10.20135/j.issn.1006-8147.2025.05.0412

文献标志码:

A

摘要:

目的：探究雷洛昔芬（Ralo）对胶质瘤生物学行为的影响以及Ralo联合替莫唑胺（TMZ）用药的效果。方法：采用CCK-8实验测定B2-17细胞系和TJ905细胞系中Ralo和TMZ的半数抑制浓度（IC50），根据IC50值将细胞分为4个处理组分为二甲基亚砜（DMSO）组、Ralo组（B2-17 18.5 μmol/L， TJ905 20 μmol/L）、TMZ组（B2-17 1 100 μmol/L ，TJ905 1 412.4 μmol/L）和Ralo+TMZ组（B2-17 Ralo 14.7 μmol/L +TMZ 140.03 μmol/L，TJ905 Ralo 16.5 μmol/L +TMZ 160.6 μmol/L）。采用 CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验、Annexin V凋亡实验评价对胶质瘤细胞系增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为的影响。采用Western印迹（WB）检测基质金属蛋白酶（MMP）2、增殖细胞核抗原抗体（PCNA）、胱天蛋白酶3（Caspase3）以及B 细胞淋巴瘤-2蛋白（Bcl-2）表达情况。根据两种药物的IC50值分别设置浓度梯度，根据结果计算联合作用指数。结果：与 DMSO 组相比，Ralo组、TMZ 组以及 Ralo +TMZ组的存活率都明显下降（B2-17：t=0.282、0.211、0.201，均P<0.05；TJ905：t=0.308、0.267、0.379，均P<0.05）；Ralo组和TMZ组凋亡率明显升高（t=5.254、7.162，t=6.769，8.623，均P<0.05），相比Ralo组与TMZ组，Ralo+TMZ组细胞的凋亡率明显上升（F=25.54、14.71，均P<0.05）。药物处理 48 h后，与DMSO组相比，Ralo组（t=6.607、4.743，均P<0.05）、TMZ组（t=6.607、4.743，均P<0.05）的间隙愈合率均出现明显降低。Ralo和TMZ联合使用后，间隙愈合率相比Ralo组和TMZ组显著降低（F=65.94、41.70，均P<0.05）；WB结果显示，Ralo 组MMP2、PCNA、Bcl-2的表达降低（t=10.26、14.69，t=7.107、10.77，t=13.78、23.53，均P<0.01），Caspase3表达显著升高（t=5.147、8.595，均P<0.01）。TMZ组同样降低了PCNA（t=9.541、11.83，均P<0.01）、MMP2（t=9.973、10.48，均P<0.01）、Bcl-2（t=18.16、29.43，均P<0.01）的表达，上调了Caspase3的表达（t=10.50，11.85，均P<0.001）。此外，相较于Ralo组和TMZ组，Ralo+TMZ组MMP2、PCNA、Bcl-2蛋白表达量均进一步降低（F=85.38、213.5，均P<0.001；F=98.55、30.08，均P<0.01；F=5.391、206.9均P<0.05），同时Caspase3表达量进一步升高（F=144.3、36.92，均P<0.001）。结论：Ralo 抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力，并诱导细胞凋亡，Ralo和TMZ联合存在协同作用。

Abstract:

Objective： To investigate the effects of raloxifene （Ralo） on the biological behavior of glioma and the therapeutic efficacy of Ralo combined with temozolomide （TMZ）. Methods： The half-maximal inhibitory concentration （IC50） of Ralo and TMZ in B2-17 and TJ905 cell lines was determined using the CCK-8 assay. Based on the IC50 values， the cells were divided into four treatment groups： dimethyl sulfoxide （DMSO） control group， Ralo monotherapy group（B2-17 18.5 μmol/L； TJ905 20 μmol/L）， TMZ monotherapy group（B2-17 1 100 μmol/L； TJ905 1 412.4 μmol/L）， and Ralo+TMZ combination therapy group（B2-17： Ralo 14.7 μmol/L + TMZ 140.03 μmol/L； TJ905： Ralo 16.5 μmol/L + TMZ 160.6 μmol/L）. The effects of the biological behaviors of glioma cell lines， such as proliferation， apoptosis， migration， and invasion were evaluated through CCK-8 assay， wound healing assay， Transwell invasion assays， and Annexin V apoptosis assay， and Western blotting was used to detect the expression of matrix metalloproteinase-2 （MMP-2）， proliferating cell nuclear antigen （PCNA）， cysteinyl aspartate specific protei-nase（Caspase3）， and B-cell lymphoma-2 protein （Bcl-2）. Concentration gradients of the two drugs were established based on their respective IC50 values， and the combination index （CI） was calculated to assess drug interactions. Results： Compared to the DMSO control group， Ralo monotherapy， TMZ monotherapy， and Ralo+TMZ combination therapy significantly reduced cell viability （B2-17：t=0.282，0.211，0.201，all P<0.05；TJ905：t=0.308，0.267，0.379，all P<0.05）. Apoptosis rates were markedly increased in Ralo and TMZ group （t=5.254，7.162， 6.769， 8.623，all P<0.05）， with the Ralo+TMZ combination therapy group showing further enha-ncement compared to the Ralo monotherapy and TMZ monotherapy （F=25.54， 14.71， both P<0.05）. After 48 hours of drug treatment， compared to the DMSO control group， the wound healing rates were significantly reduced in both the Ralo group （t=6.607， 4.743，both P<0.05） and TMZ group （t=6.607， 4.743， both P<0.05）. The Ralo+TMZ combination further suppressed wound healing rates compared to Ralo monotherapy and TMZ monotherapy group （F=65.94， 41.70， both P<0.05）. Western blotting analysis revealed that Ralo downregulated MMP-2 （t=10.26， 14.69， both P<0.01）， PCNA （t=7.107， 10.77， both P<0.01）， and Bcl-2 （t=13.78， 23.53，both P<0.01）， while upregulating Caspase3 （t=5.147， 8.595， both P<0.01）. TMZ similarly reduced PCNA（t=9.541， 11.83， both P<0.01）， MMP-2 （t=9.973， 10.48， both P<0.01）， and Bcl-2 expression （t=18.16， 29.43， both P< 0.01）， and increased Caspase3 expression （t=10.50， 11.85， both P<0.001）. Compared to Ralo monotherapy and TMZ monotherapy group， the Ralo+TMZ combination group showed further downregulation of MMP-2， PCNA， and Bcl-2 protein expression （F=85.38， 213.5， both P<0.001；F=98.55，30.08， both P<0.01；F=5.391， 206.9， both P<0.05）， along with a more pronounced upregulation of Caspase3 （F=144.3， 36.92， both P<0.001）. Conclusion： Ralo suppresses the proliferation， invasion， and migration of glioma cells while inducing apoptosis， and its combination with TMZ exhibits a synergistic antitumor effect.

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备注/Memo

备注/Memo:

基金项目:国家自然科学基金（30872985、81101915）；天津市卫生健康科技项目（MS20024）
作者简介:邱天（1999-），男， 学士，研究方向：外科学（神经外科）；通信作者：贾志凡，E-mail： jiazhfan@163.com， 王虎，E-mail： tiger_rui@163.com。

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更新日期/Last Update: 2025-10-01