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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:

32卷

期数:

2026年01期

页码:

14-22

栏目:

肿瘤疾病专题

出版日期:

2026-01-20

文章信息/Info

Title:

The functional study of TBX3 in mediating BRAFV600E-induced dedifferentiation of thyroid cancer

文章编号:

1006-8147(2026)01-0014-09

作者:

阚荣林; 赵丽

（天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，天津300070）

Author(s):

KAN Ronglin; ZHAO Li

（Department of Biochemistry and Molecular Biology， School of Basic Medical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China）

关键词:

甲状腺癌; BRAFV600E; TBX3; 失分化

Keywords:

thyroid cancer;  BRAFV600E;  TBX3;  dedifferentiation

分类号:

R34

DOI:

10.20135/j.issn.1006-8147.2026.01.0014

文献标志码:

A

摘要:

目的：探究TBX3在BRAFV600E诱导的甲状腺癌细胞失分化中的作用。方法：利用原位自发甲状腺乳头状癌小鼠模型（mPTC）以及诱导型过表达BRAFV600E的体外甲状腺失分化癌模型（Nthy-BRAFV600E Teton），分析TBX3表达水平与甲状腺癌分化基因表达变化的相关性；在体外甲状腺未分化癌（ATC）细胞系KHM-5M以及8505C中敲低TBX3，通过Western印迹、RT-qPCR、Transwell及细胞成球实验，评估其对细胞分化、迁移和干性的影响。结果：免疫组化/免疫荧光实验结果显示，在甲状腺癌进展过程中，Tbx3与分化标志物（Pax8、Tg、Nis）的表达水平呈负相关。在Nthy-BRAFV600E Teton细胞系中加入强力霉素，Western印迹结果显示随着磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的持续性激活，BRAF以及TBX3的表达水平逐渐升高。CCK-8实验结果显示，过表达BRAFV600E后细胞增殖能力明显提升（t=9.076，P<0.000 1）。选取诱导 48 h为最佳诱导时间点，此时TBX3表达水平显著升高（t=6.180，P<0.01），分化基因TG、PAX8以及FOXE1的mRNA水平明显降低（t=4.101、2.994、4.392，均P<0.05）。RT-qPCR结果显示，ATC细胞系KHM-5M以及8505C中TBX3的mRNA水平明显高于人正常甲状腺上皮细胞Nthy（q=18.82、6.562，均P<0.01）。当KHM-5M以及8505C中，TBX3的表达量明显降低（敲低组 vs. 对照组，KHM-5M中q=82.29、61.22，均P<0.000 1；8505C中q=25.89、26.71，均P<0.001）时，Western印迹结果显示NIS（q=35.50、9.343，均P<0.01；q=19.02、20.55，均P<0.001）、PAX8（q=27.72、17.16，均P<0.001；q=6.831、7.015，均P<0.05）、TPO（q=27.14、6.113，均P<0.05；q=56.34、10.81，均P<0.01）、TTF-1（q=16.69、4.576，均P<0.05；q=25.69、22.70，均P<0.001）的表达水平显著上调。Transwell迁移实验表明，敲低TBX3显著抑制了KHM-5M以及8505C的迁移能力（敲低组 vs. 对照组，KHM-5M中q=10.90、11.67，均P<0.000 1；8505C中q=14.49、35.19，均P<0.000 1）。此外，细胞成球实验结果显示，敲低TBX3后，KHM-5M以及8505C的成球能力明显降低（敲低组vs.对照组，KHM-5M中q=8.660、12.56，均P<0.001；8505C中q=10.41、14.79，均P<0.000 1）。结论：TBX3通过抑制甲状腺癌细胞分化、增强迁移能力以及维持干细胞特性，介导了BRAFV600E诱导的甲状腺癌失分化，从而促进肿瘤的恶性进展。

Abstract:

Objective： To investigate the role of T-box transcription factor 3 （TBX3） in BRAFV600E-induced dedifferentiation of thyroid carcinoma cells. Methods： The correlation between TBX3 expression and alterations in thyroid cancer differentiation gene expression was analyzed using a mouse model of in situ spontaneous papillary thyroid carcinoma （mPTC） and an inducible BRAFV600E-overexpressing in vitro dedifferentiated thyroid carcinoma cell model （Nthy-BRAFV600E Teton）. TBX3 was knocked down in vitro in human anaplastic thyroid carcinoma （ATC） cell lines （KHM-5M， 8505C）. The effects on cell differentiation， migration， and stemness were assessed via Western blotting， reverse transcription quantitative polymerase chain reaction （RT-qPCR）， Transwell， and tumorsphere formation assays. Results： Immunohistochemical and immunofluorescence analyses revealed an inverse correlation between the expression levels of Tbx3 and differentiation markers（Pax8， thyroglobulin， sodium-iodide symporter） during thyroid cancer progression. Doxycycline induction in Nthy-BRAFV600E Teton cells resulted in sustained p-extracellular regulated protein kinase 1/2 activation， accompanied by progressively increased BRAF and TBX3 protein levels. CCK-8 assays demonstrated significantly enhanced cellular proliferation upon BRAFV600E overexpression （t=9.076， P<0.000 1）. The 48-hour induction point was selected for subsequent experiments， characterized by significantly elevated TBX3 expression （t=6.180， P<0.01） and markedly reduced mRNA levels of differentiation genes TG， PAX8， and FOXE1 （t=4.101， 2.994， 4.392； all P<0.05）. RT-qPCR confirmed significantly higher TBX3 mRNA levels in ATC cell lines KHM-5M and 8505C compared to immortalized normal human thyroid epithelial cells （Nthy） （q=18.82， 6.562， both P<0.01）. In KHM-5M and 8505C， efficient TBX3 knockdown （knockdown group vs. control group： KHM-5M， q=82.29， 61.22； 8505C， q=25.89， 26.71； all P<0.001） led to significant upregulation of key differentiation proteins， as shown by Western blotting： NIS （KHM-5M： q=35.50， 9.343； 8505C： q=19.02， 20.55）， PAX8 （KHM-5M： q=27.72， 17.16； 8505C： q=6.831， 7.015）， thyroid peroxidase （KHM-5M： q=27.14， 6.113； 8505C： q=56.34， 10.81）， and thyroid transcription factor-1 （KHM-5M： q=16.69， 4.576； 8505C： q=25.69， 22.70） （all P<0.05 unless otherwise specified； specific P-values for all protein comparisons were P<0.01 or P<0.001）. TBX3 knockdown significantly attenuated the migratory capacity of both ATC cell lines KHM-5M and 8505C in Transwell assays （knockdown vs. control： KHM-5M， q=10.90， 11.67； 8505C， q=14.49， 35.19； all P<0.000 1）. Furthermore， tumorsphere formation assays revealed a significant impairment in stem cell-like properties of KHM-5M and 8505C upon TBX3 depletion （knockdown vs. control： KHM-5M， q=8.660， 12.56； 8505C， q=10.41， 14.79； all P<0.001）. Conclusion： TBX3 mediates BRAFV600E-induced dedifferentiation in thyroid cancer by repressing cellular differentiation， enhancing migratory potential， and maintaining stemness， thereby collectively promoting malignant progression.

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备注/Memo

备注/Memo:

基金项目:国家自然科学基金 （82073052）
作者简介:阚荣林（2000-），女，硕士在读， 研究方向：医学生物化学与分子生物学；
通信作者:赵丽， E-mail： shzhaoli@tmu.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2026-01-15