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[1]杨澜,周春雷,王艺霖,等.PKG抑制剂KT-5823对宫颈癌HeLa细胞活力、凋亡、自噬的影响[J].天津医科大学学报,2023,29(02):131-136.
　YANG Lan,ZHOU Chun-lei,WANG Yi-lin,et al.Effects of PKG inhibitor KT-5823 on viability，apoptosis and autophagy of cervical cancer HeLa cells[J].Journal of Tianjin Medical University,2023,29(02):131-136.
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PKG抑制剂KT-5823对宫颈癌HeLa细胞活力、凋亡、自噬的影响(PDF)
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《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:
29卷
期数:
2023年02期
页码:
131-136
栏目:
基础医学
出版日期:
2023-03-20

文章信息/Info

Title:
Effects of PKG inhibitor KT-5823 on viability，apoptosis and autophagy of cervical cancer HeLa cells
文章编号:
1006-8147（2023）02-0131-06
作者:
杨澜1; 周春雷2; 王艺霖1; 董贺楠1; 杨磊2; 穆红2
1.天津医科大学一中心临床学院，天津300192;2.天津市第一中心医院检验 科，天津300192
Author(s):
YANG Lan1; ZHOU Chun-lei2; WANG Yi-lin1; DONG He-nan1; YANG Lei2; MU Hong2
1.The First Central Clinical School，Tianjin Medical University，Tianjin 300192，China;2.Department of Clinical Laboratory，Tianjin First Central Hospital，Tianjin 300192，China
关键词:
PKG; KT-5823; 宫颈癌; 自噬; 活力; 凋亡
Keywords:
PKG; KT-5823;  cervical cancer;  autophagy ;  vitality;  apoptosis
分类号:
R737.33
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
目的：明确宫颈癌HeLa细胞对环鸟苷酸依赖性蛋白激酶（PKG）抑制剂KT-5823的敏感性，探究KT-5823对HeLa细胞活力、凋亡和自噬的影响及机制。方法：使用不同浓度的KT-5823干预HeLa细胞24h，CCK-8、免疫印迹试验分别测定细胞活力、PKG1表达水平，进而确定后续药物刺激浓度。将HeLa细胞分为两组，即DMSO组（对照组）和KT-5823组（实验组），流式细胞术检测细胞凋亡，GFP-LC3B荧光斑点实验检测自噬斑点形成数量，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测PKG1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）、Beclin1mRNA的表达水平，免疫印迹试验检测PKG1、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、自噬相关通路蛋白蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）蛋白的表达水平。增加自噬抑制剂SBI-0206965组观察自噬在此过程中的作用。结果：与对照组相比，实验组在3～100μmol/L刺激浓度下均可导致HeLa细胞活力降低（t=10.23～14.83，均P＜0.05），PKG1蛋白表达水平逐渐降低（t=10.01～14.17，均P＜0.05）。最终选取3μmol/L为刺激浓度，用于后续研究。与对照组相比，细胞凋亡增加（t=10.78，P=0.004），荧光自噬斑点数量增加（t=10.12，P=0.0005），PKG1mRNA、蛋白的表达水平降低（t=13.56，P=0.0002；t=5.461，P=0.0055）、LC3Ⅱ、Beclin1mRNA（t=8.359，P=0.0011；t=5.782，P=0.0044）、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白（t=6.924，P=0.0023；t=11.84，P=0.0003）的表达水平增加，p-Akt/Akt（t=5.194，P=0.0065）、p-mTOR/mTOR（t=12.78，P=0.0002）、Bcl-2/Bax（t=13.79，P=0.0002）的比值降低，Caspase3表达增加（t=9.341，P=0.0007）。与实验组相比，30、50、70、100μmol/L自噬抑制剂SBI-0206965组可增加细胞凋亡（t=7.616，P=0.0016；t=15.43，P=0.0001；t=11.01，P=0.0004；t=15.39，P=0.0001）。结论：PKG抑制剂KT-5823可有效抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡，同时可抑制Akt-mTOR通路诱导细胞发生自噬，且KT-5823诱导的自噬在此过程中起保护性作用，PKG可成为宫颈癌临床治疗的新靶点。
Abstract:
Objective：To determine the sensitivity of cervical cancer HeLa cells to cGMP-dependent protein kinase（PKG）inhibitor KT-5823 and explore the effects and mechanisms of KT-5823 on the viability，apoptosis and autophagy of HeLa cells. Methods：Different concentrations of KT-5823 were used to intervene HeLa cells for 24 hours. The cell viability and PKG1 expression level were detected by CCK-8 and Western blotting respectively. Then the subsequent drug stimulation concentration was determined. HeLa cells were divided into two groups，namely DMSO group（control group）and KT-5823 group（experimental group）. Apoptosis was detected by flow cytometry. The number of autophagy spots was detected by GFP-LC3B fluorescence spot test. The mRNA expression level of PKG1，microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ（LC3Ⅱ）and Beclin1 was detected by real-time fluorescent quantitative PCR（RT-qPCR）.The expression levels of PKG1，autophagy related protein LC3Ⅱ/Ⅰ，Beclin1，autophagy related pathway protein kinase B（Akt），phosphorylated protein kinase B（p-Akt），mammalian rapamycin target protein（mTOR），phosphorylated mammalian rapamycin target protein（p-mTOR），apoptosis related protein B-cell Lymphoma 2 family protein（Bcl-2），Bcl-2 related X protein（Bax）and Caspase 3 protein were detected by Western blotting. The autophagy inhibitor SBI-0206965 group was increased to observe the role of autophagy in this process. Results：Under the stimulation concentration of 3-100 μmol/L，the activity of HeLa cells reduced in the experimental group，compared with the control group（t=10.23-14.83，all P＜0.05）. The experimental group decreased PKG1 protein expression levels gradually（t=10.01-14.17，all P＜0.05）compared with the control group. Final selection 3 μ mol/L was the stimulation concentration for subsequent study. Compared with the control group，apoptosis rates increased （t=10.78，P=0.004），

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备注/Memo

备注/Memo:
基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目：（81602403）；天津市医学重点学科（专科）建设项目（TJYXZDXK-015A）
作者简介：杨澜（1997-），女，硕士在读，研究方向：医学技术；
通信作者：穆红，E-mail：tjmuhongsci@126.com。
更新日期/Last Update: 2023-04-30