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[1]纪芳菲,赵猛,牛文彦.NOD样受体NLRC4泛素化修饰的分子机制研究[J].天津医科大学学报,2026,32(02):140-145.[doi:10.20135/j.issn.1006-8147.2026.02.0140]
　JI Fangfei,ZHAO Meng,NIU Wenyan.The molecular mechanism of ubiquitination in the NOD-like receptor NLRC4[J].Journal of Tianjin Medical University,2026,32(02):140-145.[doi:10.20135/j.issn.1006-8147.2026.02.0140]
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NOD样受体NLRC4泛素化修饰的分子机制研究(PDF)

《天津医科大学学报》[ISSN:1006-8147/CN:12-1259/R]

卷:
32卷
期数:
2026年02期
页码:
140-145
栏目:
基础医学
出版日期:
2026-03-20

文章信息/Info

Title:
The molecular mechanism of ubiquitination in the NOD-like receptor NLRC4
文章编号:
1006-8147(2026)02-0140-06
作者:
纪芳菲1; 赵猛2; 牛文彦3
（1.天津医科大学医学技术学院，天津300203；2.天津医科大学肿瘤医院检验科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津 300060；3.天津医科大学基础医学院免疫学系，天津 300070）
Author(s):
JI Fangfei1;  ZHAO Meng2;  NIU Wenyan3
（1.School of Medical Technology， Tianjin Medical University， Tianjin 300203， China； 2.Department of Clinical Laboratory， Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital， National Clinical Research Center for Cancer， Tianjin′s Clinical Research Center for Cancer， Tianjin Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy， Tianjin 300060， China；3.Department of Immunology， School of Basic Medical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China）
关键词:
NLR家族含CARD结构蛋白4; 自分泌运动因子受体; 泛素化; E3泛素连接酶
Keywords:
NLR family CARD domain-containing protein 4;  autocrine motility factor receptor;  ubiquitination;  E3 ubiquitin ligase
分类号:
Q51
DOI:
10.20135/j.issn.1006-8147.2026.02.0140
文献标志码:
A
摘要:
目的：探究NLR家族含CARD结构蛋白4（NLRC4）是否存在泛素化修饰，并阐明其分子作用机制。方法：选用高转染效率的HEK293T细胞进行机制初探，应用免疫共沉淀（Co-IP）和镍-NTA亲和沉淀（Ni-NTA pull down）检测NLRC4的泛素化水平；应用亲和纯化技术联合质谱分析筛选与NLRC4相互作用的潜在泛素化调控因子；应用Co-IP、免疫荧光（IF）和邻位连接技术（PLA）验证蛋白的相互作用；通过过表达泛素化调控因子，应用Co-IP实验检测其对NLRC4泛素化水平的影响。结果：NLRC4在HEK293T细胞中存在显著的泛素化修饰；质谱鉴定结果显示E3泛素连接酶自分泌运动因子受体（AMFR）存在于NLRC4纯化的蛋白复合物中；Co-IP、IF及PLA等实验均显示NLRC4与AMFR存在直接相互作用；过表达AMFR可显著增强NLRC4的泛素化水平，泛素化NLRC4占比明显上调（t=5.294，P＜0.01）。结论：NLRC4在细胞内存在泛素化修饰，且该过程由E3泛素连接酶AMFR催化。
Abstract:
Objective： To investigate whether NLR family CARD domain-containing protein 4 （NLRC4） undergoes ubiquitination and elucidate the underlying molecular mechanism. Methods： HEK293T cells with high transfection efficiency were used for initial mechanistic exploration. Ubiquitination levels of NLRC4 were assessed using co-immunoprecipitation （Co-IP） and nickel-NTA affinity precipitation （Ni-NTA pull-down）. Affinity purification coupled with mass spectrometry was employed to screen for potential ubiquitination regulators interacting with NLRC4. Protein-protein interactions were validated by Co-IP， immunofluorescence （IF）， and proximity ligation assay （PLA）. By overexpressing ubiquitination regulatory factors， Co-IP was used to assess their impact on NLRC4 ubiquitination levels. Results： NLRC4 exhibited significant ubiquitination in HEK293T cells. Mass spectrometry analysis identified the E3 ubiquitin ligase autocrine motility factor receptor （AMFR） within the purified NLRC4 protein complex. Co-IP， IF， and PLA consistently demonstrated a direct interaction between NLRC4 and AMFR. Overexpression of AMFR significantly enhanced NLRC4 ubiquitination levels， with the proportion of ubiquitinated NLRC4 markedly increased （t=5.294，P＜0.01）. Conclusion： NLRC4 undergoes ubiquitination in cells， and this process is catalyzed by the E3 ubiquitin ligase AMFR.

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相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:
基金项目 国家自然科学基金面上项目（82270856）；天津市科技计划项目（25JCLZJC00350）
作者简介 纪芳菲（2000-），女，硕士在读，研究方向：医学检验技术；通信作者：牛文彦，E-mail：wniu@tmu.edu.cn。
更新日期/Last Update: 2026-03-20